English       中文版
常见问题
常见问题
  用户登录
用户名
密  码
          
常见问题    你现在所处的位置是: 首页 > 常见问题
> 用于TILLING筛选的目的基因有何要求?
目的基因最好为单拷贝或无相似性很高的同源基因即无其它功能冗余基因,否则即使得到了目的基因的一系列突变体也可能观察不到突变表型。如必须对有功能冗余的基因进行TILLING筛选,建议将数个同源基因同时进行TILLING筛选,将得到的突变体进行杂交后进行表型和功能分析。目标片段GC含量应在50-70%,在可扩增的情况下,GC含量应尽可能高。
> 目的基因用于进行TILLING筛选区域的选择标准是什么?
TILLING是一种反向遗传学手段,需要对目的基因收集尽可能多的信息,如基因组序列、cDNA序列和氨基酸序列等。利用这些基本序列进行同源序列分析等可以确定目的序列的保守区域,这些保守区域是进行TILLING筛选的最佳片段。可利用CODDLE软件(http://www.proweb.org/coddle/)对基因保守区域和引物进行辅助选择和设计。
> TILLING的目标区域有多大?
通常为1500bp左右为佳(此时双向测序可以测通)。如有特殊情况可增加至2000bp, 但长度的增加,会提高筛选风险,也给后期鉴定带来不必要的麻烦。最低长度可视目的基因长度而定,一般不低于800bp。短片段会降低筛选出突变体的数量。
> 引物设计有特别要求吗?
引物设计的基本原则是能够特异地扩增目的片段。通常引物长度设计为24-27个碱基,退火温度在60度左右。该目的片段的GC含量不低于48%左右,片段长度不低于800bp。 如遇特殊的基因结构,可不考虑此对上述参数可予以调整,那么但是得到的突变体数量将无法得到保证。
> 引物需自己设计和测试吗?引物需要标记荧光基团吗?
需要自己设计,并自行测试,得到单一的目标产物。通过测试后,将该序列填写至订单上,我们会安排合成。TILLING筛选采用的是新型毛细管电泳系统,引物不需要标记任何荧光基团。如不能自行设计和测试引物交由我们进行,则费用可能增加时间会延长。
> 水稻群体的背景是什么,群体数量有多大,种子为第几代?
我们的水稻诱变群体是以中花11为背景材料的,群体的数量含有6000M2单株(每个M1代株系后代只选择1株M2代植株),TILLING筛选完成后由我们邮寄的种子为M32代。
> 一般会得到多少突变体?
一般根据不同的基因往往的特点会得到不同数量的突变体,就目前的统计的数据而言,每kb会得到10-17个突变体。用于TILLING筛选的片段的碱基组成(如GC含量等)及长度(1500bp)影响得到突变体的数量。
> 自提交订单需要多长时间可以拿到突变体?
如果试剂充足,设备运行正常,设计的引物测试正常,一般30个工作日即可得到突变单株的种子。如果您需要加急,则需要支付额外1/2的费用,拿到突变体的相应的时间可以缩短一半(约为15个工作日)。如需我们代为选择目的基因的TILLING区域及合成和测试引物,则服务时间会可能会延长15个工作日以上。
> 如何做基因型鉴定?
我们会在后续实验报告里详细说明。
> 是否提供其他物种TILLING的服务?
目前,我们的平台有烟草和水稻,将来会有高粱的群体。如果您有新的物种需要我们进行TILLING服务,需要提供不低于30ug 该物种基因组DNA。群体数量应不低于1000 lines,群体的有效性需要经过委托方自行验证。
总共 10 记录   共 1 页     现在是第 1 页    首 页     上一页  下一页    末 页
地址:北京市海淀区香山南辛村20号   电话:010-62836948
传真:010-62836663   Email:croptilling@ibcas.ac.cn   网址:http://www.croptilling.com
版权所有:中国科学院植物分子生理学重点实验室    京ICP备13010300号-1